elettroresi nn denaturante

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pippilita
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6 Messaggi

Inserito il - 12 dicembre 2007 : 12:16:56

Ciao! qualcuno conosce protocolli/ricette per eseguire un'elettroforesi su acrilammide in condizioni nn denaturanti? grazie..

l�
Utente Junior

565 Messaggi

Inserito il - 13 dicembre 2007 : 17:28:37

si, io!
Tu ti fai il tuo gel di proteine alla concentrazione che vuoi ( io li faccio al 7,5% perch� cosi' i marcatori a piu' alto peso molecolare si separano meglio). Ovvio che il lower buffer e l'upper devono essere SENZA SDS!

Poi non devi scaldare i campioni prima di caricarli ( il calore denatura le proteine). Li carichi cosi' come sono, SENZA IL CRACKING BUFFER: al suo posto mettici il Gel loading buffer. Carichi e fai correre.
Quindi l'unica differenza rispetto a una elettroforesi denaturante � che:

- i buffer devono essere privi di SDS

- non devi scaldare i campioni prima di caricarli

- metti il Gel loading buffer e non il cracking buffer

Se pero' ti serve proprio un protocollo dall'inizio alla fine dimmelo che te lo mando ok?

pippilita
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6 Messaggi

Inserito il - 18 dicembre 2007 : 16:44:37

grazie L�! ancora 1 domanda nel loading buffer si mette l'upper, glicerolo, e il colorante.giusto? a che concentrazione finale � meglio che siano questi componenti? glicerolo al 10% per esempio � forse poco?
grazie sei stata gentilissima.