PCR normale e Q-PCR

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Autore

Discussione

gringoire
Nuovo Arrivato

Prov.: Gorizia
Citt�: Gorizia

4 Messaggi

Inserito il - 14 dicembre 2007 : 16:20:32

Ciao a tutti, sono nuovo in questo forum e voglio fare subito i complimenti perch� il sito � fatto veramente molto bene e non mi ha mai deluso... io frequento biotecnologie all'Universit� degli Studi di udine e avrei bisogno di una mano. Luned� ho l'esame di Biologia Molecolare 2 e tra le altre cose mi sto preparando su alcune domande che sono riuscito a recuperare da esami vecchi... solo che c'� una a cui non riesco a rispondere... mi potete aiutare? la domanda �:

"Perch� la PCR normale non � quantitativamente affidabile, mentre la Q-PCR s�? Descrivere i principi di quest'ultima"

Ok magari per qualcuno � una cavolata ma ho sempre avuto problemi con PCR e gli altri tipi soprattutto sulla distinzione... Ringrazio subito a chi mi sapr� aiutare!

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 15 dicembre 2007 : 04:34:14

La PCR classica � una cosiddetta PCR end-point, cio� parti dal DNA, lo amplifichi ed alla fine vai a vedere quanto ne hai facendo correre l'amplificato su gel.
Questo comporta che tu vada a vedere l'amplificato dopo molti cicli in una situazione in cui gran parte dei reagenti � stata consumata e in cui la reazione � arrivata a plateau. Non puoi quindi usare la luminosit� delle bande sul gel per fare una quantificazione se non relativa e comunque approssimata.

Nella realtime, invece, analizzi la quantit� di amplificato ad ogni ciclo ed hai quindi dei valori che sono presi durante la fase esponenziale di duplicazione del DNA e quindi sono quantitativi.

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gringoire
Nuovo Arrivato

Prov.: Gorizia
Citt�: Gorizia

4 Messaggi

Inserito il - 15 dicembre 2007 : 13:50:04

Grazie sei stato molto chiaro! Grazie mille!