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zio
Utente Junior
Città: Napoli (IRAQ)
120 Messaggi |
 Inserito il - 18 dicembre 2007 : 22:21:08
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 scusate l'ignoranza, magari se n'è già parlato,(ho cercato nel sito ma non ho trovato risposte sintetiche e specifiche).
la mia domanda è la seguente:
quali sono gli inibitori che possono influire su una pcr?
in particolare mi riferisco alla ricerca virus in feci di volatili
per esempio,cosa faccio se mi accorgo che un campione cdna di feci e lo stesso "inquinato"con l'estratto del positivo, non mi amplificano niente,mentre il controllo da solo viene fuori una bellezza,?  in questo caso è evidente che il campione contiene degli inibitori, ma dove è l'inghippo? come faccio ad eliminare l'inibizione se è dovuto alle dnasi/rnasi presenti nelle feci in fase di estrazione?
sarò  grato a chi mi saprà dare qualche consiglio
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zio |
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
 Inserito il - 19 dicembre 2007 : 09:11:29
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| Tratta, dopo l'estrazione dell'RNA il campione con la DNAse (noi usiamo quella della Ambion che è efficace e mantiene integro l'RNA), poi lo retrotrascrivi. |
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zio
Utente Junior
Città: Napoli (IRAQ)
120 Messaggi |
Inserito il - 19 dicembre 2007 : 23:24:43
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Citazione:
Messaggio inserito da cin
Tratta, dopo l'estrazione dell'RNA il campione con la DNAse (noi usiamo quella della Ambion che è efficace e mantiene integro l'RNA), poi lo retrotrascrivi.
 grazie Cin, seguirò il tuo consiglio, ma potresti essere più precisa? per esempio: come lo tratto il mio Rna con la DNAse? E se diluisco l'estratto? ci sono altre soluzioni?
grazie di cuore |
zio |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 20 dicembre 2007 : 00:24:04
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Ciao zio!!!
Beh il trattamento con DNasi è semplice: a 37° per 30 minuti.
Comunque guarda qui
Non so se il problema sia quello, però prova comunque è meglio trattare l'RNA con DNasi! 
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zio
Utente Junior
Città: Napoli (IRAQ)
120 Messaggi |
Inserito il - 29 dicembre 2007 : 17:32:33
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| GRAZIE ANCHE A TE GFPINA, VI FARO' SAPERE COME è ANDATA |
zio |
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cinzy82
Nuovo Arrivato
1 Messaggi |
Inserito il - 15 marzo 2013 : 00:44:14
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buonasera sono Cinzy,
ho una biopsia epatica con parte di tessuto necrotico.
Ho diversi vetrini e devo macrodissezionare l'area tumorale da quella normale, estrarre il DNA e poi eseguire una PCR.
DOMANDA:
Se dovessi prendere anche il tessuto necrotico, questo potrebbe interferire o inibire la pcr?
Se sì, mi sapete motivare la spiegazione?
Io ho cercato sui libri e in rete, ma non ho trovato niente.
Ringrazio tutti quelli che mi sapranno rispondere.
Cinzy |
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inibitori pcr
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