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nena
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Prov.: Padova
Città: Camposampiero


9 Messaggi

Inserito il - 19 dicembre 2007 : 18:57:50  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di nena  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di nena Invia a nena un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti!!ho un dubbio atroce..non riesco a capire come determinare le mutazioni di un frammento genomico utilizzando la real time PCR associata alle curve di melting!!come si procede?mentre si fa la PCR si fa salire la temperatura denaturando il DNA? e come vedo la differenza tra eteroduplex e omoduplex in queste curve HRMC?

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 19 dicembre 2007 : 23:05:56  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Roche - melting curves

Melting curve SNP genotyping (PDF)

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nena
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Prov.: Padova
Città: Camposampiero


9 Messaggi

Inserito il - 20 dicembre 2007 : 16:23:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di nena  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di nena Invia a nena un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Allora se ho capito bene, in soldoni è come una real time con intercalante ( SyBR Green ), solamente che si aggiunge la denaturazione con aumento della temperatura. Quindi se è un eteroduplex avendo dei mismatch ho un Tm inferiore e quindi diminuisce prima la fluorescenza, mentre se è un omoduplex la Tm è più alta e ho più fluorescenza...solo che non distinguo gli omoduplex wild type dagli omoduplex mutati??o anche questi hanno temperatura di melting diversa?..scusate ma non ho mai fatto pratica di queste tecniche!!
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