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zelos1
Nuovo Arrivato

Prov.: Palermo
Citt�: Palermo

31 Messaggi

Inserito il - 10 gennaio 2008 : 17:37:40

Salve.
Ho un problema con l'elettroforesi di una miniprep:
Ho trasformato dei batteri con il plasmide psv-Bgal della promega, 6820 bp, con resistenza all'ampicillina.
Fatta la miniprep di 4 colonie diverse, ho digerito il plasmide, e caricato 20microlitri di digestione su agarosio.
Ho caricato anke gli stessi campioni non digeriti.
I campioni non digeriti migrano perfettamente nelle tre forme plasmidiche, e non � presente dna genomico batterico. solo dell'rna di fondo.
I campioni digeriti hanno difficolt� ad uscire dai pozzetti, e migrano molto lentamente, e a non + di mezzo centimetro dal pozzetto.
Qualcuno saprebbe darmi una motivazione??
Il plasmide � stato digerito la prima volta con Hind III, e poi � stata fatta una prova con Eco R1 (ke avrebbe dovuto dare due frammenti di dna di circa 3000bp).
Gli ultimi 15 minuti delle due ore di digestione, ho aggiunto 1 microlitro di rnasi A.
Ho usato una quantit� di dna sia si 3 microlitri, ke di 6.
Nn � un problema di gel, perch� il marker migra perfettemente.
Grazie in anticipo, ciao.

turok
Nuovo Arrivato

Prov.: Siracusa
Citt�: Siracusa

47 Messaggi

Inserito il - 14 gennaio 2008 : 09:18:33

controlla l'enzima, prova a digerire qualke altro dna con gli stessi enzimi, o prova a prolungare i tempi di digestione.
Attenta, a volte gli enzim i si rovinano dopo scongelamento dal -20C.
Ciao

Non � perch� le cose sono difficili che non osiamo, ma � perch� non osiamo che le cose sono difficili.
Seneca.
� pi� facile spezzare un atomo che un pregiudizio.
Albert Einstein.

zelos1
Nuovo Arrivato

Prov.: Palermo
Citt�: Palermo

31 Messaggi

Inserito il - 14 gennaio 2008 : 16:36:28

ho provato due enzimi diversi, difficile che fossero tutti e due degradati.
Tra l'altro, se l'enzima nn funziona, dovrei vedere le tre bande plasmidiche, invece nn esce niente dai pozzetti...