Ciao a tutti!!!ho visto che in questo forum c'è qualcuno che se ne intende di pcr real time...quindi ne approfitto per chiedervi 2 cose su questo argomento su come fare: 1) costruzione di un dosaggio in real time pcr 2) preparazione di campioni di dna per dosaggi di real time pcr
GRAZIE IN ANTICIPO A TUTTI QUELLI CHE MI VERRANNO IN AIUTO!!!!
In effetti tra i protocolli ne manca un vero e proprio per la Real Time che poi si possa riallacciare a quello dell'amplificato purificato. Appena avrò un attimo di tempo cercherò di farlo.
devo chiedervi una cosa che nn ho capto sulla rela time:la macchina di rt,registra ad ogni ciclo la variazione doi fluorescenza al punto di flesso....ad ogni registrazione la soluzione viene diluita di 10v e il segnale compare piu' tardi,cosi viene stabilita una soglia al flesso che rapp il flesso tra la fase esponenziale e il rumore di fondo:al di sopra di essa il segnale diventa piu' significativo..ogni campione avra' una propria soglia ad ogni ciclo,a seconda della quantita' di bersaglio.potreste spiegarmi che n ho capito???