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kumal
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 Inserito il - 17 febbraio 2008 : 15:12:32
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 ciao a tutti!!! studio biotecnologie..e sono in francia per il tirocinio pre laurea..nn ho esperienze di lab...e ho bisogno di aiutoooooooooooooooo!!!!!!!!!! per la trasfezione il mio tutor ha usato: delta-lattoferrinaXflag, nm10, nm227, nm472, t559, m4, s10, ub-HA, delta DBD e dreamFect..a cosa diavolo serve tutto cio???
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la_fra
Utente
750 Messaggi |
Inserito il - 17 febbraio 2008 : 17:18:13
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onestamente se non contestualizzi un po' dove viene usato cosa è un po' difficile darti una mano, comunque dreamfect è un reagente di trasfezione tipo fugene della roche o lipofectamine della invitrogen che permette di impaccare il DNA plasmidico all'interno di microparticelle lipidiche, in modo da permetterne il passaggio attraverso la membrana cellulare idrofobica. sono metodiche ad alta efficienza che si possono usare sia in presenza che in assenza di siero, inoltre sono facili da usare perchè basta seguire il protocollo, dreamfect in particolare è molto efficiente e può essere usato in concentrazioni minori minimizzando gli effetti di tossicità per la cellula.
la lattoferrina aumenta l'efficienza di trasfezione e so che s10 è una linea di cellule stromali ma può essere qualsiasi altra cosa
Ub-HA è il vettore di espressione(ubiquitin-hemagglutinin A expression vector) che penso abbia un tag HA per eventuale purificazione es con una colonnina funzionalizzata con Ab anti HA dal lisato cellulare si può andare ad isolare le copie plasmidiche, è la prima cosa che mi viene in mente ma non avendolo mai utilizzato non so le applicazioni possibili, e soprattutto nel vostro caso.
facci sapere esattamente che cellule trasfettate e a che pro perchè per il resto non ho la piu pallida idea di che cosa tu intenda |
Doctors are men who prescribe medicines of which they know little, to cure diseases of which they know less, in human beings of whom they know nothing (Voltaire) |
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kumal
Nuovo Arrivato
Città: napoli
21 Messaggi |
Inserito il - 17 febbraio 2008 : 18:21:05
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ciao e grazie!!! allora...abbiamo preso una vaschetta con le cuvette a fondo tondo. ne abbamo selezionato 6 per il controllo e altre 6, in cui abbiamo inserito rispettivamente: delta, nm10,nm227,nm472,t559 e M4. e in tutte abbiamo inserito anche il GFP. poi abbiamo selezionato altre 8 cuvette, in cui è stato inserito rispettivamente: delta, UbHA, delta+UbHA, delta+UbHA+2.5ml glucosammina, delta+UbHA+5ml gl,delta+UbHA+10ml gl, S10+UbHA, S10non mutato+UbHA, delta+DBD. infine inserisco il dreamfect in tutte le cuvette. le cellule usate sono le HEK. la mia domanda è questa: delta è il DNA?? nm10, nm227,...sono tipi cellulari diversi?? grazie mille...putroppo nn riesco a chiarire la situazione perchè io stessa nn l'ho ben chiara........... grazie grazie... |
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la_fra
Utente
750 Messaggi |
Inserito il - 17 febbraio 2008 : 18:30:23
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scopo dell'esperimento di trasfezione..?cercherò di informarmi un po' però non ho capito una cosa, ok se non sai a cosa servano ma saprai almeno che roba è che è stata messa nelle cuvette..non hai chiesto al tuo tutor? |
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kumal
Nuovo Arrivato
Città: napoli
21 Messaggi |
Inserito il - 17 febbraio 2008 : 18:37:31
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nm sta per non mutato... delta dovrebbe essere il dna plasmidico S227/N..S10 è un tipo cellulare mutato mentre S10nm è lo stesso tipo pero wild type.. scopo dell'esperimento è quello di valutare l'espressione della proteina codificata dal gene LF (lattoferrina)implicato nel breast-cancer.... |
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la_fra
Utente
750 Messaggi |
Inserito il - 19 febbraio 2008 : 19:44:12
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scusa non ti ho piu risposto ma la questione è un po' complicata e in questi giorni non ho molto tempo causa esami, magari qualcun altro ne sa piu di me
cmq se si valuta l'espressione della lattoferrina ho detto una minchiata per il discorso dell'aumento efficienza di trasfezione ma dal primo messaggio non capivo e sono andata un po a naso
cmq ripeto non capisco bene cosa ci fai con tutta sta roba anche perchè io mi occupo poco di trasfezioni perciò ci sarà qualcuno sicuro piu ferrato |
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Trasfezione con v-ubha
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