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Autore

Discussione

doctor82
Nuovo Arrivato

17 Messaggi

Inserito il - 28 febbraio 2008 : 00:34:51

ciao ragazzi ho scritto questo messaggio anche nella sezione biologia molecolare ma forse sarebbe stato meglio metterla in questa sezione...perdonate l'inesperienza

amici ecco un altro dubbio: per semplicità diciamo che ho eseguito un esame pcr real time su un gene x in alcuni soggetti con tumore in confronto ad un gruppo di soggetti sani. e ho eseguito una pcr "relativa" nel senso che ho espresso la quantità del mio gene x in relazione ad un gene endogeno di controllo y. nel fare ciò ho usato il seguente algoritmo: ho calcolato il delta CT del gruppo di pazienti malati(sottraendo al ct medio del gene x il ct medio del gene di controllo y) e poi ho calcolato il ct del gruppo dei pazienti sani allo stesso modo; poi ho calcolato il delta delta CT sottraendo al delta CT del gruppo pazienti il delta CT del gruppo sani; dopo di che ho svolto il seguente calcolo : (2) elevato alla (meno delta delta CT) e così ho ottenuto un valore che mi esprime l'espressione relativa al gene di controllo del mio gene di studio!!!!(spero di essere stato chiaro)
ora le mie donade sono:
1)intanto l'algoritmo che ho usato è giusto?
2)se il delta delta ct mi viene negativo è giusto che io lo consideri sempre in senso assoluto quindi senza segno?
3) è corretto che il valore finale(ovvero 2 alla meno delta delta ct), anche se studiassi altri geni, mi deve venire sempre compreso tra 0 e 1?
4) se ad esempio il valore finale che ottengo è uguale a 0,4 in base a cosa posso dire che il mio gene di studio x è over espresso o sotto espresso rispetto al mio gene y di controllo?

grazie infinite per l'aiuto che potrete darmi, ps se avete bisogno di chiarimenti ditelo

chick80
Moderatore

Città: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 28 febbraio 2008 : 01:50:36

Don't worry, ti ho già risposto di là, continuiamo nell'altra discussione altrimenti si fa troppa confusione.

http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=7087

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