Immunoblotting: reprobing della membrana

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Autore

Discussione

Flavietta
Nuovo Arrivato

Prov.: Roma
Citt�: Roma

2 Messaggi

Inserito il - 28 febbraio 2008 : 15:16:22

Salve a tutti,
ho avuto un "piccolo" problema con il reprobing di una membrana di nitrocellulosa (da SDS-PAGE), che avevo usato qualche mese fa e che non pensavo di dover riutilizzare. A fine Novembre dopo la "detection" con l'ecl ho lasciato la membrana nella pellicola trasparente e l'ho messa a +4�C; la scorsa settimana invece ho dovuto riibridare questa stessa membrana, che nel frattempo si era seccata, con un altro anticorpo, per� con esito negativo.
Mi chiedevo se la causa del fallimento fosse da cercare nell'uso di una membrana ormai secca o/e nel mancato lavaggio dopo l'uso del luminolo.

GRAZIE

Iside
Utente Attivo

Citt�: Napoli

1375 Messaggi

Inserito il - 28 febbraio 2008 : 16:39:25

� sempre preferibile conservare in tampone fosfato le membrane, anche se io ho visto spesso utilizzare membrane conservate a secco. riprova a fare tutto daccapo: strippa la membrana, bloccala in BSA o quello che usi, incuba con l'ab e vedi che viene fuori. sicuramente una membrana conservata male non viene fuori come una tenuta umida.

...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...

Flavietta
Nuovo Arrivato

Prov.: Roma
Citt�: Roma

2 Messaggi

Inserito il - 29 febbraio 2008 : 10:58:05

Grazie per il consiglio, prover�!!!