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Autore

Discussione

Rossypossy
Nuovo Arrivato

Citt�: Roma

17 Messaggi

Inserito il - 11 marzo 2008 : 21:46:40

Qualcuno potrebbe indicarmi un buon protocollo per la PCR nested? Mi hanno detto ke nella prima PCR solitamente deve venire uno smir.. v risulta?Grazie!!

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 12 marzo 2008 : 02:00:16

no a me non risulta...
casomai puoi dire il contario che se ottieni una PCR con uno "smear" facendo una nested puoi risolvere il problema e ottenere una banda singola, ma questo non vuol dire che "necessariamente" nella prima PCR ci sia uno smear.
Per protocollo non so cosa ti serve, semplicemente devi scegliere due coppie di primers una interna e una esterna, fare una prima PCR con la coppia di primer esterni e utilizzare l'amplificato per fare la seconda PCR con la coppia di primer interni (io diluivo l'amplificato della prima PCR da 1:1000- 1:5000 e ne usavo un microlitro per la seconda PCR).
Qua trovi altri protocolli:
http://www.pcrlinks.com/variants/nested_pcr.htm

Cangrande
Utente Junior

Prov.: Verona

280 Messaggi

Inserito il - 12 marzo 2008 : 22:13:37

io facevo una diluizione 1:1000 e ne usavo 2ul nella reazione da25ul

Magnifico atque victoriosissimo Domino, Domino Kani Grandi de la Scala.