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Autore

Discussione

serenella
Nuovo Arrivato

Prov.: Ascoli Piceno
Città: Castignano

5 Messaggi

Inserito il - 13 marzo 2008 : 22:51:30

Sono una nuova iscritta, volevo presentarmi, salutare tutti e cogliere l'occasione per chiedere se qualcuno sa come purificare i plasmidi lineari dopo il taglio con gli enzimi di restrizione (per il clonaggio). Un metodo lo conosco, è quello classico del maniatis-sambrook ma speravo in un alternativa.
Grazie in anticipo

darkene
Utente Junior

291 Messaggi

Inserito il - 14 marzo 2008 : 10:16:08

si usano dei kit commerciali che consentono di eluire il frammento di interesse dal gel di agarosio. si corre la digestione, si taglia la banda di interesse e si usa il kit per estrarre il dna sciogliendo il gel. in particolare ne esistono di due tipi:
uno utilizza delle colonnine cromatografiche da centrifuga (es. NucleoSpin)
l'altro utilizza una resina che lega il dna (es. Quiaex II della Quiagen)

serenella
Nuovo Arrivato

Prov.: Ascoli Piceno
Città: Castignano

5 Messaggi

Inserito il - 14 marzo 2008 : 21:10:13

Grazie mille, hoi trovato un ottimo kit commerciale che purifica da gel frammenti fino a 10Kb e che usa il cristal violetto al posto dell'etidio, in questo modo evito anche danni da UV.
grazie ancora