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Patrizio
Moderatore

Citt�: Barcellona

1915 Messaggi

Inserito il - 19 marzo 2008 : 13:00:18

Salve ... sapreste dirmi se quando viene indotta l espressione di una proteina con IPTG,la replicazione di E.Coli si ferma o continua? grazie..

( secondo me dovrebbero continuare a replicarsi..ma ho cmq un dubbio )

tommasomoro
Utente Junior

358 Messaggi

Inserito il - 19 marzo 2008 : 14:25:54

fare una prova no???

T.

Patrizio
Moderatore

Citt�: Barcellona

1915 Messaggi

Inserito il - 19 marzo 2008 : 16:05:10

..un altra risposta piu' intelligente?

per tommasomoro...forse per non sprecare materiale e tempo?

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 19 marzo 2008 : 22:57:48

Si continuano a replicarsi!!!

@ tommasomoro: magari se qualcuno ha fa una domanda � perch� ha bisogno di una conferma per non dover ripetere l'esperimento no???
Non tutti sono in laboratorio a giocare e fare prove...

l�
Utente Junior

565 Messaggi

Inserito il - 19 marzo 2008 : 23:22:14

si continuano a crescere!

Patrizio
Moderatore

Citt�: Barcellona

1915 Messaggi

Inserito il - 19 marzo 2008 : 23:38:12

GFPina non te la prendere con quel poveraccio di tommasomoro se non c arriva...comunque grazie

l� mi dici come fai a confermarmi questo?

Ayla
Utente Junior

Citt�: Wageningen

573 Messaggi

Inserito il - 20 marzo 2008 : 00:21:43

Continuano a crescere e infatti la soluzione diventa pi� opaca col tempo, ma crescono fino a un certo punto, nel senso che si arriva a una fase stazionaria per cui la quantit� di mezzo di coltura limita il numero massimo di cellule. (ecco perch� se vogliamo che continuino a crescere dobbiamo reinoculare in terreno fresco!)

Patrizio
Moderatore

Citt�: Barcellona

1915 Messaggi

Inserito il - 20 marzo 2008 : 00:43:19

si ayla...che non e' che li devo crescere per 3 anni e portarli all asilo ...che una proteina mi devono dare,e volevo sapere se con l IPTG si alterava la replicazione..cmq ho risolto

l�
Utente Junior

565 Messaggi

Inserito il - 20 marzo 2008 : 13:04:02

lo so' perch� anche io mi ero posta la stessa domanda 4 anni fa quando ho iniziato a purificare. Mi sono documentata e da nessuna parte ho trovato che l'IPTG va ad alterare la replicazione batterica. Serve solo per l'induzione dell'espressione proteica, ma questo la sai gi�.

tommasomoro
Utente Junior

358 Messaggi

Inserito il - 21 marzo 2008 : 10:07:17

secondo me puo' dipendere dalla proteina che esprimi

e' per questo che si fanno degli expression trials

per ottimizzare la produzione di proteina ricombinante

quindi: "fare un aprova no???"

- quindi continua con lo stesso tempo di duplicazione ?

- qual'e' la percentuale dei batteri che perde il plasmmide di espressione
o in cui avvengono ricombinazione che annullano la overespressione ?

- e la differenza nel tempo di duplicazione fra chi mantiene e chi perde il
plasmide ?

- e i batteri hanno tutti lo stesso numero di copie del plasmide di
espreessione ???

visto che sapete tutto senza provare ????

pensavo di parlare con empirici e non teorici !!!

T.

Patrizio
Moderatore

Citt�: Barcellona

1915 Messaggi

Inserito il - 22 marzo 2008 : 15:02:26

considerando quanto dura un protocollo di espressione e purificazione della proteina....e visto che in altri momenti se n'e' avuta tanta..io non vedo nessuno scopo di fare tutto questo lavoro,poi lo scopo del forum � appunto chiedere a altri... che magari possono aver avuto gli stessi problemi e aver fatto le prove... e questo evita di ripetarle

per il primo tuo punto..puo' dipendere dalla proteina solo se � tossica per il batterio,o se interferisce con fattori di replicazione

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