clonaggio di un break point

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ilarip
Utente Junior

Prov.: Bologna
Citt�: Bologna

432 Messaggi

Inserito il - 31 marzo 2008 : 17:49:14

ciaoooo ragazzi
qualcuno ne sa qualcosa????
i lucidi del professore nn sono chiari per niente

ciaooo e grazie

Ho imparato.. .che le opportunit� non vanno mai perse.
Quelle che lasci andare tu...le prende qualcun altro
Ho imparato...che � meglio dare consigli solo in due circostanze...
Quando sono richiesti e quando ne dipende la vita.

paolo865
Utente Junior

Prov.: Como
Citt�: Olgiate Comasco

262 Messaggi

Inserito il - 31 marzo 2008 : 23:40:57

Per il clonaggio di un break point se non sbaglio parti all'inizio utilizzando diverse sonde per fare una FISH su cromosomi metafasici e osservi quale sonda � in grado di ibridare su 3 punti: sul cromosoma parentale normale e sui due derivati. A questo punto la sonda per fish(che sar� almeno di 10 Kb) la vai a clonare in vettori i capienza pi� piccola in modo da ridurre la dimensione della sonda, e verifichi sempre che queste sonde pi� piccole ibridino in tre punti. Alla fine dovresti riuscire a clonare il solo frammento di Dna (magari un gene) a livello del quale � avvenuto il break point.

ilarip
Utente Junior

Prov.: Bologna
Citt�: Bologna

432 Messaggi

Inserito il - 01 aprile 2008 : 09:55:09

Grazie mille
una cosa per� nn ho capito come faccio a clonare la sonda in vettori di capienza pi� piccola??????
magari la domanda ti sembrer� banale.....
ciaoooooo e grazie ancora

Simona84
Utente Junior

Citt�: milano

131 Messaggi

Inserito il - 07 aprile 2008 : 09:25:29

il clonaggio dei breakpoint si fa mediante l'uso di sonde BAC o PAC per anadare a identificare il pi� accuratamente possibile il punto di rottura del cromosoma e quindi l'origine dell'eventuale cromosoma derivativo. si attuano diversi esperimenti di FISH con diverse sonde, partendo da sonde che mappano in zone distanti dal punto di rottura per avvicinarsi sempre di pi� a esso.Le sonde vengono scelte au opporuni database e sotto la guida di quanto evidenziato dal bandeggio Q (� il primo passaggio che si fa, ha una bassa risoluzione ma d� un'idea della banda in cui si trova il breakpoint). i segnali non mi risulta che debbano essere tre devi perch� i avrai un chr normale e il derivativo quindi ti aspetti che se la sonda ibrida una regione mantenuta sul derivativo avrai due segnali uno sul chr normale e uno sul derivativo, altrimenti se qquella regione viene persa si avr� solo il segnale sul chr normale e non sul derivativo. i risultati iniziano a essere sufficientemente descrittivi quando la zona di breakpoint � inferiore almeno alle 20.000 bp, ovviamente minore � l'ntervallo migliore sar� la caratterizzazione del breakpoint. spero di essere stata abbastanza chiara!

ilarip
Utente Junior

Prov.: Bologna
Citt�: Bologna

432 Messaggi

Inserito il - 07 aprile 2008 : 09:52:26

grazie mille chiarisima.....

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