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vesania
Nuovo Arrivato

Citt�: rovigo-ferrara-rovigo

98 Messaggi

Inserito il - 31 marzo 2008 : 19:01:02

Sto studiado tecnologie ricombinanti su un libro che a mio avviso non trovo per nulla ben fatto, ma solo confusionario. Sono alla sezione per la regolazione di geni eucariotici tramite utilizzo del sistema tet on / tef of.
partiamo dal fatto che ho capito benissimo i che:
- tet on: si utilizza tetR ( wilde type) fusa a vp16 e quindi vi � espressione del gene targhet in assensza di tetraciclina

- tet of: rTetR (mutata) fusa a VP16, dove l'espressione dl targhet vi � in presenza di tetraciclina.

il libro parla di vettore responsivo che contieneper la proteina tetR fusa a vp16 posta sotto i controlo di un prpomotore di CNVche4 la esprima in modo costitutivo e di un vettore regolativo che contiene elemento che risponde alla tetraciclina TRE posto a monte del gene targhet il ttto conato all'interno del promotore minimo di CMV in modo che non sia costitutivamene espresso.

il mio dubbio �:
quindi io per avere il sistema tet � che devo avere DUE vettori (UNO REGOLATIVO E UNO RESPONSIVO) per perettere la regolazione dell'espressione del gene targhet sia con tet on che con tet of?

Iside
Utente Attivo

Citt�: Napoli

1375 Messaggi

Inserito il - 31 marzo 2008 : 19:55:32

vedi se questo pu� esserti utile: tet-on/tet-off

...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...

vesania
Nuovo Arrivato

Citt�: rovigo-ferrara-rovigo

98 Messaggi

Inserito il - 01 aprile 2008 : 09:25:59

dimenticavo di dire che quella sezione io l'avevo gi� vista! e il concetto l'ho capito del funzionamento quello che chiedo io �:

quindi io per avere il sistema tet � che devo avere DUE vettori (UNO REGOLATIVO E UNO RESPONSIVO) per perettere la regolazione dell'espressione del gene targhet sia con tet on che con tet of?

grazie

Iside
Utente Attivo

Citt�: Napoli

1375 Messaggi

Inserito il - 01 aprile 2008 : 14:04:31

guarda che dal link si capisce benissimo. per un sistema di regolazione tet-dipendente, nel caso di tet-OFF si usano 2 costrutti (come li chiami tu, uno responsivo e l'altro regolatorio) anche se questo non � del tutto vero, perch� oggi si riesce a far esprimere i transgeni portati prima da 2 costrutti, in un solo vettore di espressione.
per Tet-ON il principio � lo stesso, sempre 2 costrutti e questo � vero fino in fondo, nel senso che ancora oggi (o almeno fino all'anno scorso quando l'ho studiato io), non si riesce a far esprimere tutto in un singolo vettore.

tutto questo si riferisce a vettori lentivirali.

...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...

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