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kumal
Nuovo Arrivato

Citt�: napoli

21 Messaggi

Inserito il - 03 aprile 2008 : 17:58:19

ciao a tutti.real time pcr. se ottengo un grafico in cui un campione presenta un picco con 2 temperature differenti cosa vuol dire? qualcuno puo spiegarmi come si commentano i risultati di una pcr real time?

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 03 aprile 2008 : 19:28:19

Per il grafico con i due picchi penso tu ti riferisca alla curva di melting, qua trovi delle spiegazioni in proposito:
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=2538

Per come si commentano i risultati... il discorso � lungo e non so bene cosa ti serve, per� se cerchi nel forum ci sono tantissime discussioni ade se. ti consiglio queste:
- Analisi risultati: http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=1423
- Normalizzazione: http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=3813

kumal
Nuovo Arrivato

Citt�: napoli

21 Messaggi

Inserito il - 03 aprile 2008 : 19:38:13

ciao e grazie..ma purtroppo non mi riferivo a due picchi con 2 Tm differenti, ma a 1 unico picco fiancheggiato da due spigoli e indicanti 2 temperature differenti.. non so come spiegarlo..e nn ho trovato nulla su internet, n� nel forum. in particolare credo ch quei due spigoli stiano ad indicare una possibile mutazione puntiforme. per� boh..non so

markjo74
Nuovo Arrivato

Prov.: Napoli
Citt�: ercolano

6 Messaggi

Inserito il - 09 aprile 2008 : 00:16:45

non ho capito quello che dici..mandami un allegato a markjo74@libero.it e forse posso aiutarti
ciao

cin
Utente Junior

Prov.: Padova
Citt�: Padova

558 Messaggi

Inserito il - 11 aprile 2008 : 08:45:01

Hai in gergo una brutta melting, fai correre in gel d'agarosio quell'amplificato in modo da riuscire a vedere cos'�, fai una corsa lenta e lunga. Forse stai amplificando anche qualcos'altro.
Ma il tuo campione � cDNA?

kumal
Nuovo Arrivato

Citt�: napoli

21 Messaggi

Inserito il - 12 aprile 2008 : 10:46:21

ciao a tutti e grazie! uso cDNA di mda-MB. in particolare ho fatto una pcr real time e ho ottenuto per differenti campioni di DNA lo stesso risultato: 2 picchi di temperature: 76�c (massimale)e 78�C. essendo troppo vicine non indicano amplificati aspecifici, ma una possibile mutazione di sequenza. la cosa assurda � che il prodotto di questa pcr l'ho sottoposto a un'ulteriore real time ottenendo un risultato completamente opposto! 78�C massimale! come si spiega questo? forse la mutazione � nei primers che nn complementano bene? come si procede ora? markio ti ho inviato l'allegato! grazie

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