nell' ibridazione in situ, ch cosa vuol dire fissazione del campione, come si fà?ovunque c'è scritto: "dopo la fissazione..." ma nessuno dice che è sta fissazione, e per me sta diventando una fissazione... vebbè battutaccia... ma qualquno sa cos'è?
La fissazione è necessaria per preservare la morfologia cellulare. Esistono vari tipi di fissativi (utilizzati sia in immunoistochimica/citochimica che per l'ibridazione in situ) Trovi alcuni esempi in questo protocollo: http://www.molecularlab.it/protocolli/protocol.asp?id=22
Di solito come controllo si utilizza una sonda complementare che non ibridizza (controllo negativo). Spiegandomi meglio, la sonda che utilizzi è complementare all'RNA che vuoi andare a vedere e quindi si lega a questo, se invece disegni una sonda con sequenza uguale all'RNA questa non si lega e serve come controllo negativo. Poi puoi utilizzare come controlli anche tessuti o cellule dove sei sicura che sia espresso (controllo positivo) o non espresso (controllo negativo) l'RNA che cerchi. Dimenticavo prima ma nella sezione protocolli ci sono anche protocolli per la ISH: Disegno sonde per ibridazione in situ Sintesi di probe radioattiva per in situ In situ hybridization radioattiva
Inoltre qua trovi altre informazioni che ti possono essere utili: