Quanto č utile/interessante questa discussione:
| Autore |
Discussione |
|
|
lucialucia
Nuovo Arrivato
6 Messaggi |
 Inserito il - 07 maggio 2008 : 14:38:21
|
Ciao a tutti, avrei bisogno di qualche dritta sull'immunoprecipitazione: posso fare l'IP con un anticorpo policlonale e dopo la corsa sul gel rilevare sulla membrana la proteina precipitata con lo stesso anticorpo?
aumenta il segnale di fondo?
purtroppo ho a disposizione un solo anticorpo verso la proteina di interesse...
qualcuno ha esperienza a proposito?
Grazie mille!
Lucia
|
|
|
|
|
Luca-DNA
Nuovo Arrivato
Prov.: Torino
Cittā: Torino
68 Messaggi |
Inserito il - 07 maggio 2008 : 20:01:14
|
Ciao Lucia,
puoi fare di certo IP usando un anticorpo policlonare e decorare il blot utilizzando lo stesso anticorpo.
Penso che l'aumento del segnale di fondo dipenda dall'anticorpo (puoi sempre aumentare il numero di lavaggi delle beads di sepharose dopo l'incubazione dei lisati in modo tale da diminuire l'aspecifitā).
Io faccio molte IP in questo modo, utilizzando anticorpi policlonali, ed in genere i blot mi vengono molto puliti... |
A scientific man ought to have no wishes, no affections, - a mere heart of stone. (C. Darwin) |
 |
|
|
Iside
Utente Attivo
Cittā: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 07 maggio 2008 : 21:22:29
|
io ho fatto delle immunoprecipitazioni usando lo stesso anticorpo sia per l'IP vera e propria che per il blot. come ti diceva luca-DNA, stai attenta a fare lavaggi abbondanti e prolungati. l'unica cosa che ti potrebbe dare qualche problema, sono le bande delle catene leggere dall'anticorpo, che potrebbero sovrapporsi con la banda della tua proteina, ma questo dipende dal pm della proteina che stai immunoprecipitando. se ha un peso molto maggiore o minore di quello delle IgG allora non dovresti avere problemi.
|
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
|
|
|
| |
Discussione |
|
|
|
Quanto č utile/interessante questa discussione:
| MolecularLab.it |
© 2003-18 MolecularLab.it |
|
|
|
Immunoprecipitazione
Didattica e Relazioni
