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stef2
Nuovo Arrivato
21 Messaggi |
 Inserito il - 08 maggio 2008 : 19:38:31
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Ciao a tutti ,
mi sto approcciando "mondo" della pcr per DNa ed RNA.
Purtoppo in lab non mi spiegano molto e vorrei capire cosa si intende di concentrazioni di DNA espresse in gamma e se lo stesso discorso vale anche per l'RNA. Inoltre vorrei capire quali sono le concentrazioni ottimali di DNA ed RNA da cui partire per avere una buona reazione di PCR.
Utimo problema che mi sta avvilendo,sto effettuando estrazioni di DNA da strisci di sangue periferico da vetrino (conservato a T ambiente),vecchi di circa 20 anni a campioni degli ultimi anni. Generalmente non ho problemi per l'estrazione di dna dai vetrini più recenti, invece per quelli vecchi la riuscita dell'estrazione è random, nel senso che non sempre ottengo DNA anche per estrazioni effettuate contemporaneamente,sotto le stesse condizioni.
Una precisazione, ho pensato che potesse essere un problema legato al fatto che le cellule più vecchie erano più fissate e non si staccavano dal vetrino,quindi ho fatto diverse prove,prima usando sol fisiologica per staccarle,aiutandomi con una spatolina, poi direttamente buffer di lysis su vetrino ed infine al posto della sol fisiologica PBS 1X.
Quale potrebbe essere la variabile dell'estrazione e magari miei probabili errori?
Un grazie anticipato a chiunque mi risponderà!!! 
a presto
Stef
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stef2 |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 08 maggio 2008 : 20:08:41
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non so aiutarti su tutte le domande che hai fatto, però posso dirti che relativamente alle concentrazioni del DNA espresse in gamma, ci si riferisce ai microgrammi, così come potresti sentire usare la parola lambda riderita ai volumi ed è semplicimente un altro modo di dire microlitro.
vedi anche : http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=5040
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...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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stef2
Nuovo Arrivato
21 Messaggi |
Inserito il - 09 maggio 2008 : 09:37:20
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grazie per il tuo supporto!!!  |
stef2 |
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