Quanto č utile/interessante questa discussione:
| Autore |
Discussione |
|
|
valia
Moderatore
Prov.: UK
1001 Messaggi |
 Inserito il - 20 novembre 2005 : 15:32:21
|
Ho un problema concettuale con una tecnica che sto usando..
E' grave lo so..ma mi servono solo un po' di conferme!
Io ho l'RNA estratto da un tessuto.. aggiungo dNTPS, retrotrascrittasi, oligo dT and so on, cosi' ottengo il cDNA!
E questo sara' a single strand, no?
Ma di questo me ne serve un fammento particolare, per cui faccio una semplice PCR, usando primer F e R..
Alla fine ottengo il frammento di interesse double strand..
Perche' all'inizio si appaia solo il primer F e ottengo un filamento molto lungo, a questo si appaia il reverse.. e cosi' via!
Giusto?
E poi, sapete per caso perche' la Taq aggiunge una A alle estremita' del frammento amplificato???
Ultima cosa.. l'mRNA ha alla estremita' delle A.. (per questo posso retrotrascriverlo con oligo d(T)). Sapete perche'??
Grazie infinite
|
|
|
|
|
biotech
Utente Junior
Prov.: Padova
Cittā: Padova
170 Messaggi |
Inserito il - 20 novembre 2005 : 16:47:19
|
Se non erro prima viene creata la molecola senso, per cui si appaia al primer f credo (no me ne intendo molto di primer forward e reverse), poi la seconda elica viene creata servendosi di tre enzimi.
Mi sembra che la Taq lo faccia perchč le A aggiunte diventano dei primers che fanno da innesco per creare l'elica complementare.
E' tipico dell'RNA avere la coda poli-A; serve come segnale di riconoscimento del ribosoma e questa sua caratteristica viene utilizzata per creare poli T. |
http://boincstats.com/signature/user_1342603.gif |
 |
|
|
chick80
Moderatore
Cittā: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 20 novembre 2005 : 20:02:52
|
Non tutte le taq aggiungono code al DNA. Alcune aggiungono code es. di poly-dA altre non aggiungono niente, altre aggiungono altre code... dipende da che enzima usi.
Il DNA degli eucarioti (ma non quello dei batteri) in genere e' poliadenilato, anche se ci sono geni che non hanno questa coda.
La coda di poly-A stabilizza l'mRNA e come ha giustamente detto biotech serve x il corretto legame col ribosoma.
Infatti quando inserisci un vettore con un transgene in cellule euk. e' buona cosa mettere un segnale di poliad. alla fine del gene. |
Sei un nuovo arrivato?
Leggi il regolamento del forum e presentati qui
My photo portfolio (now on G+!) |
|
|
| |
Discussione |
|
|
|
Quanto č utile/interessante questa discussione:
| MolecularLab.it |
© 2003-18 MolecularLab.it |
|
|
|
RT PCR
Didattica
