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Discussione |
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
 Inserito il - 21 novembre 2005 : 10:33:34
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Vi è mai capitato di avere delle curve di intensità di fluorescenza strane, nel senso che partono già altissime rispetto agli altri campioni nella stessa piastra, però poi procedono come gli altri campioni e alla melting non hanno problemi? Avete capito da cosa dipende?
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
 Inserito il - 21 novembre 2005 : 16:58:40
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Come faccio ad inviarti l'immagine? Ho provato ad allegare un file, ma non ci sono riuscita.
Grazie Cin |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
 Inserito il - 21 novembre 2005 : 20:35:59
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Potrebbero esserci dei limiti nella dimensione di upload, non so... (dovrebbe dircelo Ricky)
Puoi usare imageshack. Uploadi l'img li', prendi il link che ti da' e lo incolli qui (prendi il link per i forum num 1). |
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
Inserito il - 23 novembre 2005 : 12:56:27
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La curva strana è quella rosa fucsia, le altre sono gli standards
Immagine:
22,71 KB e le H2O |
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
Inserito il - 23 novembre 2005 : 14:45:59
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| la curva rosa è un punto dello standard, ma in questa seduta anche parecchi campioni avevano quest'andamento. Ho pensato al cover...l'unica cosa che ho fatto di diverso è stato passare la spatolina tra pozzetto e pozzetto. |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 23 novembre 2005 : 20:15:29
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Hmmm... veramente strano... ma se metti i campioni in duplicato che succede? Sembra tra l'altro che ci sia molto rumore di fondo.
Io personalmente ti consiglierei di non considerare un campione del genere, anche perche' ti sballa i Ct: se usi il threshold della figura ad es., il campione blu ha un Ct di circa 26, quando il valore piu' corretto sembrerebbe attorno a 22 (e 4 cicli in real time sono tantissimo!)
Il rumore di fondo cosi' alto, poi, potrebbe dipendere dal fatto di avere un threshold alto.
Consiglio: metti tutti i campioni in duplicato/triplicato e vedi che succede. |
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
Inserito il - 25 novembre 2005 : 09:42:19
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Il rumore di fondo alto è sempre così, nel senso che la nostra macchina (MJ) non fa nessuna sottrazione matematica per eliminarlo come invece fa l'Applied Biosystem (sempre in nostra dotazione, ma che usiamo solo per le sonde).
Forse in effetti nel decidere la threshold non dovrei tener conto del rumore di fondo, invece cerco sempre di stagli sopra.
La curva è in duplicato (come i campioni), anche se le doppiette della curva standard fanno schifo.
C:\Documents and Settings\utente\Documenti\panna\diapo forum.ppt
Se sono riuscita a mandare queste immagini (per l'altra mi aveva aiutato il mio capo), c'è lo schema della piastra dove sono evidenziati i campioni sdrolbi dei quali si vede la curva di intensità di fluorescenza strana.
Non è un problema campione dipendente perchè avviene su un campione si ed uno no della stessa doppietta; non è un problema pozzetto dipendente perchè a me non è mai successo (anche se una mia collega dice che a lei accade sempre per almeno un campione,non nella stessa posizione, e solo quando ha le piastre);io ho pensato al cover forse strisciato, proverò a ripetere quei campioni sempre su una piastra ma tappando con i tappini.
Ah, non ti ho mai ringraziato per la tua disponibilità.
GRAZIE |
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
Inserito il - 25 novembre 2005 : 09:44:04
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| A quanto pare non ci sono riuscita a spedire l'immagine, va bè aspetto che arrivi la Gabri ( il grande capo) e lo farò. |
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
Inserito il - 25 novembre 2005 : 10:08:58
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è arrivato il grande capo......
Immagine:
49,96 KB |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 25 novembre 2005 : 11:56:46
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Ah ok, io ho sempre lavorato su una macchina dell'Applied quindi vedevo un rumore di fondo molto piu' basso.
E' chiaro che x fare un'analisi corretta dovresti stare sopra al rumore di fondo con il treshold, non so quanto sia corretto scendervi al di sotto...
Prova a usare le strip di provette invece delle piastre. Io le trovo piu' comode (cioe sono scomode entrambe... ma tra i due mali...  )
Assicurati anche che non ci siano bolle sul fondo della provetta, quelle ti sballano la lettura tantissimo.
E' anche utile pulire i pozzetti prima di usare la macchina. Di sicuro quella dell'AB ti permette di vedere se ci sono pozzetti sporchi, non so l'altra. Io di solito usavo una punta da P200 con arrotolato sopra un fazzolettino impregnato di etanolo che passavo nei pozzetti. E' un po' uno sbattimento, ma almeno rimuovi un po' di rumore.
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
 Inserito il - 25 novembre 2005 : 13:22:39
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grazie mille di tutto, se ci saranno novità le metterò nel forum |
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kià
Nuovo Arrivato
Prov.: Padova
Città: padova
8 Messaggi |
Inserito il - 25 novembre 2005 : 13:36:09
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| Ciao ciao Cinzia! |
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Discussione |
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curve strane in real
Didattica
