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Klo
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
107 Messaggi |
 Inserito il - 16 maggio 2008 : 16:29:31
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Ciao a tutti! Il mio problema è questo: devo calcolare la concentrazione del DNA a partire dall'OD. Il protocollo diceva di prelevare 5ul della soluzione col DNA e aggiungerli a 95ul di TE.
vorrei sapere se i calcoli che ho fatto sono giusti.
Il mio OD260= 0.212
Il volume iniziale = 5ul
Il volume finale = 100ul
Sapendo che: 1OD260= 50ug/ml
Il fattore di diluizione: (5uli : 100ulf) = 20
[DNA]ug/ml = A260 * 50ug/ml * fattore di diluizione =
= 0.212 * 50ug/ml *20 = 212ug/ml
DNA(ug) = [DNA]ug/ml * Volume =
=212 ug/ml * 100ul = 212 ug/ml * 0.01ml= 2,12 ug
E' corretto o ho fatto un casino?
Grazie mille!
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domi84
Moderatore
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Klo
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
107 Messaggi |
Inserito il - 16 maggio 2008 : 22:24:57
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Grazie mille! A dire il vero è proprio da lì che avevo preso la formula per calcolare la concentrazione del DNA altrimenti non sapevo proprio da dove cominciare, è solo per eccesso di insicurezza, volevo accertarmi di non aver scritto una stupidaggine visto che il procedimento lo devo scrivere nella relazione che dovrò consegnare!In ogni caso credo che più o meno ci sta quello che ho scritto
Grazie ancora |
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
Inserito il - 17 maggio 2008 : 10:16:05
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La prima volta che ho letto il tuo post ho dato un occhiata veloce, e non mi ero accorto di un errore...
La formula è:
OD * 50 (DNA) * diluizione (ad es. 1/10)
quindi nel tuo caso
0,212 * 50 * 1/20 = 0,53
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Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato... |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 17 maggio 2008 : 12:58:35
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No veramente i conti di Klo erano giusti!!!
La formula è :
OD(260) * 50ug/ml (DNA) * fattore di diluizione
Se una soluzione viene diluita 5ul + 95ul H2O, quindi 1:100, il fattore di diluizione è 20 (non 1/20).
Per non sbagliare pensate una cosa:
parto da una soluzione concentrata e per leggerla allo spettrofotometro la diluisco!
Quello che leggo nella cuvetta è la soluziona diluita!
(es. OD(260) * 50ug/ml (DNA)= 0.212 *50 = 10.6ug/ml)
Ma la soluzione da cui sono partito è più concentrata, quindi devo ottenere un valore maggiore!
Moltiplico per il "fattore di diluizione"
(es. 10.6ug/ml * 20 = 212ug/ml)
Trucchetto: la diluizione utilizzata 5 + 95 non è casuale! Spesso si utilizzano diluizioni 5:100 per il semplice fatto che il fattore di diluizione è 20 che moltiplicato per 50 (50ug/ml (DNA)) da: 1000 ... e questo evita di fare i conti!
OD260= 0.212 --> 212ug/ml |
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
Inserito il - 17 maggio 2008 : 14:25:21
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O cacchio!!!
E' proprio arrivato il momento di andarmi a rivedermi queste cose...e di ricominciare a fare i calcoli a mano, invece di usare quel maledetto foglio di calcolo che ho preparato un po' di tempo fa...
Scusa Klo!!! |
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Klo
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
107 Messaggi |
Inserito il - 18 maggio 2008 : 10:32:38
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GRAZIE MILLE!!!!
Siete stati davvero molto gentili, vi devo ringraziare 2 volte una per avermi fornito la formula e l'altra per aver dato un'occhiata ai miei calcoli!Grazie |
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[DNA] da analisi spettrofotometrica
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