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darkene
Utente Junior
291 Messaggi |
 Inserito il - 23 novembre 2005 : 11:47:13
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qualcuno può spiegarmi in dettaglio la strategia utilizzata negli anni 80-90 per isolare e clonare il gene Ras? se non sbaglio è il saggio di trasformazione DNA-mediato, vero? come funziona?
grazie!
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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prossima biologa
Utente Attivo
1437 Messaggi |
 Inserito il - 24 novembre 2012 : 12:53:12
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| DARKENE...mi sa che hai avuto il mio stesso docente... ahahaha mamma mia ma allora sono anni che da queste domande spiegando male questo argomento( e non solo) |
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prossima biologa
Utente Attivo
1437 Messaggi |
Inserito il - 24 novembre 2012 : 14:28:16
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SOLO CHE io sapevo che fosse stata fatta una DILUIZIONE TRASFORMANTE... cioè fu infettata la linea cellulare NIH3T3 di topo, con DNA isolato da tumore alla vescica. DNA isolato da tumore umano.
e quando questa trasfezione avviene, si sviluppano dei foci tumorali, da questi fu isolato il DNA, e quello umano è quello che contiene il gene ONCOGENE, quindi facendo southern blot, fu usata la sonda per sequenze ALU, che sono sequenze presenti solo nei primati, e in tal caso, trovo DNA umano, ma quest'ultimo non sarà solo quello che ha causato la tasformazione, perchè ALU è presente un pò ovunque nel genoma umano.
così fu pensato di fare le DILUIZIONI TRASFORMANTI. cioè partire dai foci di NIH3T3 e chiamarli 1 generazione. da questi isolare il DNA e trasfettare altre cellule NIH3T3, e ripetere l'esperimento 3 volte.
alla terza generazione, il DNA che ibrida con ALU, è quello che ha causato la trasformazione neoplastica e quindi ho isolato l'oncogene....
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prossima biologa
Utente Attivo
1437 Messaggi |
Inserito il - 24 novembre 2012 : 14:57:54
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se ho capito bene, il concetto della diluizione dovrebbe essere che, ogni volta che prendo DNA da una cellula tumorale, ho il DNA umano del tumore di partenza, ma ovviamente non avrò preso solo quella frazione, solo quel gene... quindi ogni volta che parto da una nuova generazione, la trasfezione avrà fatto perdere del DNA umano????
è questo il senso?
perchè se così non è, allora non capisco il senso dell'esperimento |
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isolamento oncogene Ras
