|
chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 26 dicembre 2003 : 21:32:11
|
Prova ad aumentare la temperatura di annealing (procedi con step di 0.5-1 °C).
Questo dà condizioni di annealing più stringenti, quindi forse avrai un po' meno amplificato, però dovrebbe dare meno aspecifico.
Un altra possibilità è fare una nested PCR: in pratica hai 2 coppie di primer, una è quella che già usi, ed un'altra sarà più esterna. Fai prima una PCR con quelli esterni, poi riamplifichi il tutto con quelli interni. In questo modo se dalla prima amplificazione avrai ottenuto dell'aspecifico, questo non sarà (solitamente) amplificato anche dalla seconda coppia di primer.
Un'ultima alternativa, ovviamente, è quella di ridisegnare i primer... 
Ciao e buone feste!
nICO
|
 |
|
amplificazione
Didattica e Relazioni
