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marco86
Nuovo Arrivato
Prov.: Novara
6 Messaggi |
 Inserito il - 01 giugno 2008 : 13:36:42
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Ciao ancora, ho qualche difficoltà a comprendere il sistema a doppio ibrido relativo al fattore Gal4. Se riuscite con parole vostre a farmelo capire.. Più che altro mi è poco chiara la situazione in cui, mettendo l'inserto in un vettore, si lavora su terreno auxotrofo x tre amminoacidi che sono leu, Trp e His. Grazie
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mark86 |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 01 giugno 2008 : 14:45:23
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ciao marco86, già provato con la funzione cerca di questo forum? ci sono discussioni interessanti a riguardo. Ti aiuto: 1, 2 e 3. c'è anche altro materiale che puoi provare a cercare da solo, sempre nel forum.
hope it helps you, 
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...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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ale87
Nuovo Arrivato
Prov.: Cremona
Città: crema
6 Messaggi |
Inserito il - 06 giugno 2008 : 15:57:36
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negli eucarioti l'espressione dei geni è controllata da attivatori. gli attivatori sono costituiti da 2 domini proteici: 1 dominio di attivazione che recluta l'RNApol e un dominio di legame che ha il compito di legare il DNA in una regione a monte del promotore.
il sistema del doppio ibrido serve per studiare l'interazioni proteina-proteina di 2 proteine scelte da me.
praticamente uso un ceppo di lievito deficitario per un attivatore di un gene reporter che, percui, risulta spento. l'attivatore in questione è GAL4, attivatore di GAL10.
Inserisco un DNA artificiale costituito dalla sequenza nucleotidica che codifica peril dominio di legame e per la sequenza che codifica 1 delle 2 proteine che sto studiando. l'inserzione ovviamente va fatta in un vettore. il ceppo non è ancora in grado di esprimere GAL10 perchè dell'attivatore gal4 ha solo il dominio di legame.
faccio una cotrasformazione del ceppo di lievito con un'altro vettore in cui ho inserito la seq nucleotidica del dominio di attivazione e dell'altra proteina che sto studiando.
se le 2 proteine interagiscono tra loro si ricostituisce GAL4 e, percui, viene espresso GAL10.
io lo sapevo così.... non ho mai sentito parlare di lavorare (in questo contesto) di usare un terreno auxotrofo per quegli amminoacidi..... mi disp! |
ax |
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