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magda1981
Nuovo Arrivato

19 Messaggi

Inserito il - 09 giugno 2008 : 12:55:09

ciao!
ho un problema.....
sto valutando l'efficacia dei miei primer in real time pcr con sybr green!
dopo amplificazione nella curva di melting ho un solo picco quindi deduco che non ho formazione di dimeri ne contaminazioni....mentre ho ritrovato amplificazione nel mio controllo negativo (no DNA)!
come � possibile?
grazie mille

Verina
Utente Junior

Citt�: Milano

285 Messaggi

Inserito il - 09 giugno 2008 : 13:21:16

contaminazione?

gianpierolandolfi
Nuovo Arrivato

84 Messaggi

Inserito il - 09 giugno 2008 : 16:59:27

potresti avere scambiato le happy (eppendorf) se nei tuoi campioni di controllo positivo non hai ottenuto niente.
Senn' come ha detto Verina molto probabilmente non avendo cambiato puntale hai contaminato...

Dionysos
Moderatore

Citt�: Heidelberg

1913 Messaggi

Inserito il - 09 giugno 2008 : 17:02:46

Magari contaminazione accidentale del solo controllo negativo

Volere libera : questa � la vera dottrina della volont� e della libert�
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!

Topogigio77
Nuovo Arrivato

Citt�: Milano

37 Messaggi

Inserito il - 11 giugno 2008 : 09:04:36

concordo su contaminazione: cambia acqua o usa un'aliquota diversa di primers o una mix SYBR differente.
Ma non trovate che ormai, con i costi a reazione ormai irrisori delle sonde TaqMan, ormai non valga pi� la pena fare SYBR? Incideranno per 5 centesimi a reazione, ma non devi mettere a punto nulla...boh, parere mio...

magda1981
Nuovo Arrivato

19 Messaggi

Inserito il - 18 giugno 2008 : 12:09:10

grazie!
penso contaminazione mix sybr green.....