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Clivi
Nuovo Arrivato
22 Messaggi |
 Inserito il - 26 giugno 2008 : 17:50:13
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Ciao a tutti,
sapete dirmi qualcosa sulla blue native page e sulle sue applicazioni? La prof a lezione ci ha detto che si può effettuare in abbinata alla 2D oppure alla SDS-PAGE, ma non ho capito la differenza...
avete qualche foto o link che mostri come si visualizzano questi 2 approcci?
Inoltre perchè viene chiamata BLUE?
Un grazie in anticipo!
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darkene
Utente Junior
291 Messaggi |
Inserito il - 26 giugno 2008 : 21:05:12
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la blue native è una elettroforesi che si effettua in condizioni native. questo ti permette di separare su un gel di acrilammide i complessi proteici. si chiama blue perchè sia il campione sia il buffer di corsa è preparato con il blue di Coomassie che, come l'SDS, dona una carica negativa alle proteine ma non le denatura (il gel dopo la corsa diventa tutto blu!). il blotting di questo gel ti da informazioni sull'assemblaggio di complessi proteici.
inoltre, una volta che hai corso questo gel puoi fare la 2D, che è un SDS-PAGE: quello che fai è tagliare la lane di interesse, ruotarla di 90°, posizionarla tra due vetrini e colarci attorno un gel con SDS. questo provoca la denaturazione delle proteine e quindi la separazione delle subunità che formavano i complessi. a fine corsa fai un blotting normale e quello che avrai è che tutte le proteine che si trovano sulla stessa riga verticale fanno (per lo più) parte dello stesso complesso.
in questa immagine puoi vedere una prima dimensione:
http://www.biochemj.org/bj/345/0239/bj3450239f07.gif
qui prima e seconda dimensione
http://www.nature.com/embor/journal/v4/n4/images/embor800-f1.gif
ti auguro di non doverla mai fare perchè ti assicuro che, anche se è una tecnica fighissima, è una gran rottura!
io la uso per studiare l'assemblaggio dei complessi della catena respiratoria mitocondriale. un tipico protocollo è questo:
http://www.mitosciences.com/PDF/BNPAGE.pdf |
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1914 Messaggi |
Inserito il - 26 giugno 2008 : 21:18:17
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Citazione:
Messaggio inserito da darkene
io la uso per studiare l'assemblaggio dei complessi della catena respiratoria mitocondriale. un tipico protocollo è questo:
http://www.mitosciences.com/PDF/BNPAGE.pdf
Darkene che complesso studi in particolare? e dove? |
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Clivi
Nuovo Arrivato
22 Messaggi |
 Inserito il - 26 giugno 2008 : 22:45:47
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Grazie Darkene anche per la celere risposta! Sei stato grandioso!!!
Buon lavoro allora! |
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terreno85
Utente Junior
235 Messaggi |
Inserito il - 03 febbraio 2010 : 23:38:06
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Ma se io vi dico di disegnare un 2-DE e poi disegnare una elettroforesi in condizioni native come le disegnereste?? per esempio pI = 3.2 - 4.2 - 6.3 - 7.3 e PM= 65 - 112 - 180 - 35 (RISPETTIVAMENTE)
Allegato:  andrea.doc.doc
26,03 KB |
Una teoria può esserre provata da un esperimento. Ma nessun percorso guida dall'esperimento alla nascita di una teoria |
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giuliaginger
Nuovo Arrivato
Prov.: SP
Città: La Spezia
1 Messaggi |
Inserito il - 23 aprile 2010 : 18:38:07
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Ciao a tutti!
non è che mi potete dire come fate a caricare il campione nel gel considerando che il buffer a contatto con la cameretta di corsa è blu?io non riesco a vedere i pozzetti e carico a secco...ma non credo gli faccia molto bene!
scusate se chiedo qui ma non mi sembrava il caso di aprire una nuova discussione per una banalità come questa ^^
grazie mille
byebye Giulia |
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