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baggio25
Nuovo Arrivato
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 Inserito il - 10 luglio 2008 : 22:08:06
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Ciao a tutti, sono nuova del FORUM mi chiamo Marianna e ho bisogno del vostro aiuto.
Mi sapete dire come sia possibile che cellule quasi completamente morte (circa 80%) secondo un'analisi effettuata al tripan blue, se valutate al FACS, mediante l'utilizzo del propidio ioduro, non presentano un picco in fase subG1?
 Però se vado a valutare il grafico che mi mette in correlazione FS (forward scater) e SS(side scatter) mi ritrovo che rispetto alla popolazione di controllo (dove non ho morte) le cellule del mio campione (quelle morte all'80%) mostrano una distribuzione del tutto anomala, spostata tutta verso l'origine degli assi (quindi con riduzione dei due parametro).
Non sono un'esperta di FACS, anzi, a dire il vero è il mio primo FACS per cui vi chiedo gentilmente di aiutarmi e spiegarmi tutto ciò che sapete in merito. Vi ringrazio tutti. Marianna 
Allegato:  FACS.pdf
30,58 KB
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la_fra
Utente
750 Messaggi |
 Inserito il - 10 luglio 2008 : 22:43:40
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| penso che se sono spostate verso l'origine degli assi perchè data la mortalità sono principalmente necrotiche e perciò hai un sacco di detriti, quando hai apoptosi hai comunque una modificazione delle dimensioni cellulari per la condensazione citoplasmatica ma questo vuol dire generalmente che le cellule appaiono più piccole (riduzione di FSC) e più granulose (aumento di SSC), quello che non so è come dovrebbe essere il grafico di una popolazione necrotica perchè io l'ho sempre usato per valutare il blocco in G1 dopo aver visto che c'era effettiva apoptosi tramite il sistema annexina/PI |
Doctors are men who prescribe medicines of which they know little, to cure diseases of which they know less, in human beings of whom they know nothing (Voltaire) |
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la_fra
Utente
750 Messaggi |
Inserito il - 11 luglio 2008 : 10:17:24
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| scusa ieri ho detto una c..ata ma ero cotta e non faccio la subG1 da un po', devi amplificare la prima parte del plot perchè se tieni la scala del counts a 2000 non lo vedrai mai, fatti un plot con la scala a 200 su FL3-H vedi se così il picco c'è |
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baggio25
Nuovo Arrivato
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Inserito il - 11 luglio 2008 : 13:51:59
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Ciao grazie mille, anche se non sono riuscita a fare ciò che mi hai detto perchè non ho dimestichezza col programma e a dire il vero non so cosa significhi FL3-H. Comunque anche riducendo la scala del counts non vedo un picco, però concordo con te sul fatto che può trattarsi di necrosi.
Ti ringrazio ancora una volta per la disponibilità Marianna.
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la_fra
Utente
750 Messaggi |
Inserito il - 11 luglio 2008 : 14:36:13
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mh vedo se trovo qualcosa di cartaceo qnd ho un attimo comunque mi son dimenticata di dirti che la fl3-H la devi mettere in logaritmica. anzichè lineare. se vedi il picco lo capisci se è necrosi perchè hai un ammasso verso l'origine degli assi anzichè un picchetto piu o meno definito della subG1
adex sono in lab e non ho molto tempo vedo cosa riesco a trovare x spiegarti meglio anche la teoria
ma nessuno li sa dirti come funziona' ti affidano la brutta bestia del FACS e via? |
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la_fra
Utente
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Inserito il - 11 luglio 2008 : 16:46:14
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Allegato: cellcyc.pdf
454,12 KB
dai un occhio a questo pdf che ti spiega cosa si intende per Fl2 ( o 3) W-H e A. Qui da me si usa la FL3-H ecc quando si legge il ciclo cellulare perchè la mia dottoranda dice che l'emissione del PI nella 3 è meglio che nella 2, ma il principio è sempre lo stesso..ciaociao.. |
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baggio25
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 11 luglio 2008 : 22:17:36
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Ciao e grazie ancora... il pdf che mi hai mandato è stato utilissimo a livello teorico, ma il mio problema è che (non so perchè) ma tra il software tra i parametri non mi fa selezionare nessuno tra i parametri FL2 o 3. Come mai?
Grazie per la pazienza |
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la_fra
Utente
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Inserito il - 15 luglio 2008 : 09:20:24
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| usi cell quest come quasi tutti? devi andare sul pannello detect/amp e selezionare il parametro DDM in basso a destra |
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baggio25
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Inserito il - 20 luglio 2008 : 11:29:26
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| Ciao. Scusami se ti rispondo solo ora ma non ho avuto tempo di connettermi in precedenza. Comunque non uso cellQuest ma Summit della Dako o WinMDI (che è gratis) invece ho provato a scaricare cellQuest ma non è free. Adesso provo un pò a vedere se c'è un'opzione simile sui programmi che ho io. |
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