te lo spiego ioooooo! il DNase I Footprinting è un'analisi che ti consente di osservare il legame tra fattori di trascrizione proteici e DNA. I vecchi protocolli prevedono l'impiego di una sonda marcata radioattivamente legata al frammento di DNA che devi analizzare. successivamente questo templato marcato lo tratti con una miscela di proteine contenente anche quella/e che tu ipotizzi possano "sedersi" sulla tua sequenza di DNA (ad esempio proteine estratte da organi di ratto o proteine derivanti dall'estrazione di cellule coltivate in vitro). in seguito tratti con DNasi in modo che questa vada a tagliare aspecificamente il tuo DNA dove non si sono legati fattori di trascrizione perchè questi proteggono il DNA dal taglio. Stop solution per fermare la DNasi e poi purifichi e precipiti in modo da eliminare le proteine legate al DNA: ti restano frammenti grandi (prima coperti dalle tue proteine) e più piccoli. con un gel di poliacrilammide visualizzi i siti di copertura. nel mio laboratorio la tecnica è stata ottimizzata in modo da usare sonde fluorofore e sequenziamento tramite FLOE...per chiarimenti scrivi ;)
Sì scusami GFpina non avevo visto che il btavo patrizio aveva già aggiunto il link. mq grazie a tutti per il Vostro in bocca al lupo.Lesame è andato bene bene bene, anche grazie a numerose nozioni prese e chiarite da questo Forum..l'unico veramente interessante e fatto bene che io conosca