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ilatwins
Utente Junior


Città: pavia


121 Messaggi

Inserito il - 14 luglio 2008 : 10:41:34  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ilatwins Invia a ilatwins un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti!
Sto studiando il western blot e mi si è presentata la tecnica a sandwich...ma nn riesco a capire in cosa consiste...qualcuno sa aiutarmi?
Grazie a tutti quelli che proveranno a dirmi qualcosa.

domi84
Moderatore

Smile3D

Città: Glasgow


1724 Messaggi

Inserito il - 14 luglio 2008 : 11:38:11  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di domi84 Invia a domi84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Non esiste una tecnica "a sandwich"! Il cosiddetto sandwich è uno dei passaggi per fare il Western Blot. Consiste nel fare questa struttura:


Dall'alto verso il basso sono:
Griglia lato nero
2 fogli
Gel
membrana PVDF o nitrocellulosa
2 fogli
Griglia lato bianco (o rosso)

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...
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frau_frosch
Utente Junior

Mourn

Città: Boston


225 Messaggi

Inserito il - 14 luglio 2008 : 11:46:08  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di frau_frosch Invia a frau_frosch un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Nel Western il sandwich è la sovrapposizione tra gel, membrana e carta assorbente che crei per mediare il tuo trasferimento.
Solitamente lo schema è questo:

    POLO POSITIVO
  _________________  -> spugna
  _________________  -> carta assorbente 
  _________________  -> membrana (nitrocellulosa, nylon o PVDF)
  _________________  -> gel
  _________________  -> carta assorbente 
  _________________  -> spugna
    
    POLO NEGATIVO


Le proteine, essendo cariche negativamente (il pH è basico, 8.3 o giù di lì), migreranno verso il polo positivo,restando intrappolate nel gel.
Se ti servono approfondimenti chiedi pure.
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frau_frosch
Utente Junior

Mourn

Città: Boston


225 Messaggi

Inserito il - 14 luglio 2008 : 11:49:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di frau_frosch Invia a frau_frosch un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ops..nel frattempo aveva risposto anche domi e meglio di me! Sorry!
beh ora la visione dal basso e dall'alto!
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ilatwins
Utente Junior


Città: pavia


121 Messaggi

Inserito il - 14 luglio 2008 : 14:47:50  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ilatwins Invia a ilatwins un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ah ok allora era tutto chiaro.
MA ad un certo punto sul libro parla di tecnica a sandwich (esattamente scritto così) e non ci ho capito più nulla!!!
Ora tutto risolto...grazie a voi!
Siete fantastici!
Mi togliete mille dubbi!
grazieee
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