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swiss_redfox
Nuovo Arrivato
Città: Lausanne
12 Messaggi |
 Inserito il - 18 luglio 2008 : 13:52:53
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Ciao a tutti!
Ho una domanda riguardante l'estrazione di DNA da cellule di mammifero. Il mio obiettivo finale è di quantificare il numero di copie di DNA plasmidico che sono riuscita a trasfettare nelle mie celluline.
Ho un protocollo che come primo step prevede il trattamento del pellet cellulare con DNAse (x togliere eventuali residui di DNA che nn è entrato nelle cellule o qllo che ne è già uscito dalle cellule morte): la mia domanda riguarda l'inibizione dell'enzima. Normalmente si aggiunge EDTA (x chelare Mg2+ e/o Mn2+ di cui ha bisogno) e si scalda a 65°C 10' (suppongo x unfoldarlo): il problema è che in qsto caso scaldo anche il pellet cellulare...è vero che dopo devo lisare le cellule x isolare i nuclei ma nn c'è il rischio che il trattamento a 65°C mi distrugga anche gli organelli interni (nuclei compresi) in maniera incontrollata? Dall'altro lato la sola aggiunta di EDTA basta ad inibire l'enzima?
se qcno ha una risposta o può darmi un consiglio ... GRAZIE!!!! 
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trattamento con DNAse pre-estrazione DNA
Didattica
Inserito il - 21 luglio 2008 : 22:17:29
