recupero plasmidi di lievito

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hurricane86
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50 Messaggi

Inserito il - 30 luglio 2008 : 00:12:02

salve a tutti, dopo mesi di assenza (lo s� sono una sciagurata) sono tornata!!!
ultimamente mi st� scontrando con frustranti tentativi andati a vuoto

di uno stupidissimo (a detta del prof) esperimento:
l'estrazione di DNA plasmidico da un lievito trasformato con una banca genomica avente un marcatore anche per coli (resistenza ampicillina)e la trasformazione con quest'ultimo di coli per amplificarlo, riestrarlo e sequenziarlo
bene:il batterio non ne vuole sapere di essere trasformato!!
ho provato sia con gli elettrocompetenti che con i chimici, sia preparati da noi in laboratorio sia commerciali, � stata rifatta pi� e pi� volte l'estrazione dal lievito...saranno pi� di 10 ormai i tentativi (eeeh allegria) cambiadto ogni volta una diversa variabile: la quantit� di coltura di partenza, l'OD, le concentrazioni dei tamponi, al caldo, al freddo, il proticollo, la concentrazione di rispospensione finale, la quantit� che fornisco ai batteri...nulla!!!
qualcuno sa darmi un'ipotesi per questa disfatta di caporetto?!
grazie a tutti!

Think I'll lose my mind if I don't find something to pacify

....muore lentamente chi non esplora cio che non conosce....

tonni88
Nuovo Arrivato

3 Messaggi

Inserito il - 14 ottobre 2013 : 15:39:47

mmm... quanto � grande il plasmide?? sopra le 12 kb diventa molto difficile...
a proposito... come estrai il dna da lievito? usi un kit? se si quale?