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Autore

Discussione

Luisa G.
Nuovo Arrivato

Prov.: Messina
Citt�: messina

19 Messaggi

Inserito il - 02 agosto 2008 : 11:42:40

Ola!
Mi ritrovo a cercare informazioni su delle metodiche a me sconosciute:l'estrazione di DNA da saliva attraverso l'ausilio della resina Chelex 100, la multiplex PCR e dopo corsa su gel di poliacrilamide, la rivelazione tramite silver staining.
Devo riuscire ad orientarmi ancor prima di vedere i protocolli!

Quindi vi chiedo delle conferme e degli aiuti!
1. La chelex si aggiunge direttamente al campione di saliva per preservare il DNA e successivamente si bolle?Si pu� dunque utilizzare il surnatante ottenuto da centrifugazione direttamente in mix di PCR? Esiste un protocollo disponibile (il citatissimo Walsh et al.1991 non riesco a trovarlo!!)
2. La multiplex differentemente da una comune PCR ha solo l'aggiunta di una "minore" concentrazione dei primers (visto che se ne aggiungono diverse coppie)? E che resa mi d�? Quante coppie posso utilizzare nella stessa mix?
3. Il silver staining..questo sconosciuto!Come si effettua la metodica?E come si visualizza il tutto, tramite blot?
Vi ringrazio moltissimo in anticipo