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Elsar
Nuovo Arrivato

15 Messaggi

Inserito il - 02 agosto 2008 : 12:12:09

Salve a tutti. Spero che qualcuno possa aiutermi. Devo eseguire un cariotipo in laboratorio, il mio professore mi ha dato solo il punto d'inizio, cio�, devo bloccare la cellula in mitosi con la colchicina. Ora devo indicae le fasi successive, compresa la colorazione. Mi sapreste dire quali sostanze devo usare?
Grazie a tutti anticipatamente

Simona84
Utente Junior

Citt�: milano

131 Messaggi

Inserito il - 02 agosto 2008 : 13:37:13

in realt� il protocollo di allestimento dei preparati cromosomici varia in base al tipo di cellule che stai usando. in generale comunque si fa un primo passaggio in soluzione ipotonica 1:1 di sodio citrato 1% e KCl 0.075 mol/l per circa 20 minuti a t.a. poi fai un pre-fissaggio aggingendo 1-2 ml di fix (metanolo:acetico 3:1) e poi fai 2/3 passaggi sempre in fissativo da circa 15 minuti ciascuno.
Alla fine risspendi il pellet di cellule finale in una quantit� di fissativo che cambia di volta in volta in base alla quantit� del preparato e alla concentrazione che vuoi ottenere. Procedi allo striscio su vetrino. Bisogna valutare lo stato delle metafasi e la loro apertura a microscopio a contrasto di fase. Le condizioni di striscio vanno stabilite volta per volta. Per esempio se le metafasi non si aprono bene � meglio lasciare il vetrino pi� bagnato e strisciarlo sopra a una fonte di umidit� come per esempio un bagnetto acceso. se invece si aprono troppo e i cromosomi si "sparpagliano" in giro � meglio asciugare il vetrino e dopom lo striscio farlo asciugare sotto una lampada.
I vetrino strisciati vengono conservati per un giorno a ta.se si vuole effettuare la colorazione lo stesso giorno lasciare il vetrino in stufa a 60�C per 2 ore.
Per colorare il vetrino lo si immerge per qualche secondo nella mostarda di quinacrina e poi si lava in tampone McIlvaine. Il vetrino viene montato in tampone e osservato a microscopio a fluorescenza.spero di esserti stata d'aiuto!
ciaooo