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fediscola
Nuovo Arrivato
Cittā: bristol
10 Messaggi |
 Inserito il - 27 agosto 2008 : 16:13:14
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Salve a tutti,
ho un mega problema da risolvere che mi sta facendo diventare matta!
Da circa 2 mesi il miio western blot a smesso di funzionare!!!
Premetto che nn e' mai venuto bene bene, ma lameno riuscivo a vedere le bande!
Il mio target ha un peso di 43kD (connexin43) ho transfettato in HEK293 cells due diversi plasmidi uno che codifica per Cx43 per indurre una overexpression, e l'altro che codifica per Cx43ShRNA per indurre il silenziamento della stessa.
L'anticorpo che uso e' ovviamente sempre lo stesso, ed e' abbastanza buono (chemicon) discreto.
Il protocollo che uso, nn e' stato variato di una virgola, uso un semi-dry transfer e per il segnale incubo cn supersignal west pico.
carico 50ug di proteine..
il risultato che ho e' una membrana parecchio sporca piena di spots, senza bande vissibili...oltre a quelle del marker ovviamente!
se controllo le proteine trasf con il Poinceau sono ok!
magari l'anticorpo e' vecchio?
e' conservato in N3Na
Vi prego aiutatemi!!!
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fede |
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WB: nessun segnale specifico
Didattica
