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Luis 22
Utente
Città: Bari
755 Messaggi |
 Inserito il - 06 gennaio 2006 : 23:04:25
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Posso applicare questo saggio per osservare se una certa proteina (DNA binding protein) si lega ad una sequenza specifica del DNA e non in modo sequenza indipendente; utilizzo quindi un competitore freddo, rappresentato dallo stesso tipo dei frammenti marcati.
L'intesità del segnale diminuisce, poichè le proteine si legheranno anche alle sequenza specifiche presenti sul competitore freddo!
Ma ora mi chiedo, una diminuzione del segnale non si verificherebbe anche se le proteine si legassero in modo aspecifico? Dopotutto, i frammenti di DNA marcati e quelli freddi sono sempre dello stesso tipo e la competizione si può verificare anche per un legame sequenza indipendente!
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La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine è vivere, sfogliarli a caso è sognare. (Arthur Schopenhauer)& |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
 Inserito il - 06 gennaio 2006 : 23:24:07
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| Mai fatto, ma io farei anche un controllo con delle sequenze fredde casuali: se l'intensita diminuisce solo con la tua sequenza e non con quelle random allora e' un processo sequenza specifico |
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Luis 22
Utente
Città: Bari
755 Messaggi |
Inserito il - 06 gennaio 2006 : 23:27:56
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Ma infatti, volendo, si potrebbero anche usare oligont sintetici poli(dI - dC), che legano le proteine aspecifiche, in modo da poter rilevare solo i frammenti con sequenze specifiche di legame!
Questo saggio di competizione, invece, non sembra poi tanto utile...
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 07 gennaio 2006 : 01:53:12
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Beh, in realta' con questo saggio puoi vedere quanto sia specifico il legame vedendo quanto diminuisce il segnale.
Ad es. puoi mettere la stessa sequenza con diverse mutazioni e vedere quanto diminuisce l'intensita' con le varie mutazioni.
Se con una certa mutazione l'intensita' diminuisce molto meno puoi dire che i nucleotidi che hai mutato sono importanti per il legame della proteina. |
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