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Clivi
Nuovo Arrivato
22 Messaggi |
 Inserito il - 12 settembre 2008 : 08:15:38
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Ciao ragazzi...avrei bisogno di una risposta urgentissima...
Per l'estrazione e purificazione di DNA genomico da sangue ho usato un kit che prevede l'utilizzo di colonnine che contengono una matrice di silice. Tuttavia non riesco a capire su cosa si basano. Nel kit c'è solo scritto che la matrice "assorbe" il DNA. Ma la matrice è carica (+ o -)? Avvengono interazioni elettrostatiche tra i 2? Oppure il principio su cui si basa il kit è una cromatografia di affinità?
Non riesco a capire. Ho guardato nel forum se questo argomento è stato già postato ma non ho trovato nulla.
Grazie... 
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 12 settembre 2008 : 09:11:18
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Mi sembrava di ricordare ci fosse una discussione in proposito.. ma in effetti non la trovo neanch'io! 
Comunque la matrice è carica positivamente (essendo il DNA invece -) ed è una cromatografia a scambio ionico.
Per maggiori dettagli ti consiglio di leggere questo:
Sistemi di estrazione del DNA: metodi a confronto (pdf)
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Clivi
Nuovo Arrivato
22 Messaggi |
Inserito il - 12 settembre 2008 : 09:29:13
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Grazie mille per il celere aiuto GFPina!!!!
Ma se è una cromatografia a scambio ionico come fa ad "assorbire" il DNA?
E' più giusto dire quindi che ci sono interazioni elettrostatiche?
Grazie per il pdf, l'avevo fatalità già letto prima di scrivere qui, però testona come sono non sono riuscita a capirne qualcosa da sola...  |
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Clivi
Nuovo Arrivato
22 Messaggi |
Inserito il - 12 settembre 2008 : 09:32:40
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Ho riletto bene e mi sono chiarita...
Grazie ancora! |
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 12 settembre 2008 : 10:52:17
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Però mi sa che non è sempre così.
Ora non ho qui niente per verificare (mi propongo di
postare in seguito quando avrò info più precise)
ma mi pare di ricordare che:
- le colonnine per MIDI-prep sono a scambio ionico (+/-)
- le colonnine per MINI-prep sono ad affinità
E' possibile secondo voi? |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 12 settembre 2008 : 18:37:36
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Citazione:
Messaggio inserito da Dionysos
Però mi sa che non è sempre così.
Ora non ho qui niente per verificare (mi propongo di
postare in seguito quando avrò info più precise)
ma mi pare di ricordare che:
- le colonnine per MIDI-prep sono a scambio ionico (+/-)
- le colonnine per MINI-prep sono ad affinità
E' possibile secondo voi?
Come osi contraddirmi???  
(tranquilli Dionysos lo sa che scherzo... )
Quello che fa la differenza non è il "formato" ma la resina utilizzata, si parlava di "matrice di silice", questa è carica positivamente e quindi si ha una cromatografia a scambio ionico.
Per avere una "cromatografia per affinità" dovresti avere una resina che contenga qualcosa di "affine" a cui si leghi la molecola che vuoi isolare, ad es. poliT per isolare mRNA.
Comunque nell'allegato mi sembra spiegato chiaramente!
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 12 settembre 2008 : 19:11:24
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Sì in linea di principio hai ragionissima, però siccome mi sembrava d'aver letto su qualche
manuale di mini-prep (forse quello del vecchio kit della Amershan) il termine "affinity
purification" magari esistono resine che legano polifosfati come il DNA in modo non
dipendente dalla carica, ma forse proprio dalle dimensioni, dalla forma, boh.
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Colonnine con membrana di silice
Didattica
