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Autore Discussione  

ilatwins
Utente Junior


Città: pavia


121 Messaggi
Inserito il - 16 settembre 2008 : 11:28:21  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ilatwins Invia a ilatwins un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Southern, Western e northen blot?
So le differenze di questi trasferimenti...ma perchè si usano?
Per fare poi analisi di ibridazione?E poi?
Si eseguono dopo elettroforesi che già ha diviso i frammenti in base al peso molecolare, si ibrida per conoscere la sequenza primaria dei frammenti?
Ma per fare questo nn si sequenzia?
Temo di nn capirne l'utilità o forse sono solo taaanto confusa.
Help me, please

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 16 settembre 2008 : 12:09:29  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Southern blot -> Analisi di DNA
Northern blot -> Analisi di RNA
Western blot -> Analisi di proteine

Sono tecniche qualitative/semiquantitative che ti servono per vedere se un certo DNA/RNA o proteina sono presenti (e quanto) in un campione.
Non si usano per sequenziare nel senso che devi usare una sonda per rilevare i frammenti, quindi la sequenza la devi sapere in partenza. O, nel caso del western devi già avere un anticorpo contro la proteina di interesse.
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ilatwins
Utente Junior


Città: pavia


121 Messaggi
Inserito il - 16 settembre 2008 : 13:18:58  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ilatwins Invia a ilatwins un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Giusto!...quindi si costruisce la sonda complementare al frammento di cui si vuole conoscere la presenza o meno nel campione....sbaglio?
Ma perchè prima del trasferimento su membrana si ricorre all'elettroforesi? Per dividere le diverse componenti di una soluzione? Altrimenti nn sarebbero distinguibili?
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domi84
Moderatore

Smile3D

Città: Glasgow


1724 Messaggi
Inserito il - 16 settembre 2008 : 13:34:24  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di domi84 Invia a domi84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da ilatwins

Per dividere le diverse componenti di una soluzione? Altrimenti nn sarebbero distinguibili?

Esatto! Altrimenti le vedresti tutte in 1 punto...
Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 16 settembre 2008 : 14:22:41  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Anche per avere una conferma sul peso molecolare. In realtà l'elettroforesi non è strettamente necessaria, puoi fare un dot-blot o uno slot-blot in cui metti direttamente la sonda o l'anticorpo senza fare elettroforesi.
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Aureus
Utente Junior

0613_da_Fil23

Prov.: Forlì-Cesena
Città: Gambettola


123 Messaggi
Inserito il - 16 settembre 2008 : 14:46:46  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Aureus  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Aureus Invia a Aureus un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ragazzi è arrivato il momento di inventare l'Esthern Blot...
...avete nuove idee per un analisi così creativa?
www.tlbspazio.it

Tecnici di Laboratorio Biomedico
Lorenzo Nardi
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ilatwins
Utente Junior


Città: pavia


121 Messaggi
Inserito il - 16 settembre 2008 : 15:16:12  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ilatwins Invia a ilatwins un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Infatti era quello che mi chiedevo...se inserissi la sonda senza fare elettroforesi lei si andrebbe comunque a legare...ma forse nn si distinguerebbe bene l'ibrido da tutto il resto? e quindi si fa l'elettroforesi?
Grazie a tutti
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 16 settembre 2008 : 15:48:18  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Infatti era quello che mi chiedevo...se inserissi la sonda senza fare elettroforesi lei si andrebbe comunque a legare...ma forse nn si distinguerebbe bene l'ibrido da tutto il resto? e quindi si fa l'elettroforesi?


Esatto! E poi ad es. nel western blot il tuo anticorpo può riconoscere diverse varianti con peso diverso, oppure ad es. dimeri della tua proteina etc etc che distingui solo facendo un'elettroforesi
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ilatwins
Utente Junior


Città: pavia


121 Messaggi
Inserito il - 16 settembre 2008 : 15:58:30  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ilatwins Invia a ilatwins un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ora è chiarissimo!!!!!!!!!
Sto esame mi sta davvero facendo dannare
Poi sono una che si fa mille domande e quindi perde un sacco di tempo.
Meno male che ci siete voi così mi confronto un pò!!!!!!!!!
grazie a tutti!!!!!
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