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MatAr
Nuovo Arrivato

3 Messaggi

Inserito il - 26 settembre 2008 : 10:36:44

salve a tutti!

avrei una semplice domanda da porre: la quantità di plasmide utilizzato per trasformare cellule competenti può influire sull'efficienza di trasformazione? ovvero, esiste un limite nella qtà di plasmide da utilizzare o è meglio usarne sempre un eccesso?

grazie

morgan79
Utente Junior

Prov.: Bari

143 Messaggi

Inserito il - 27 settembre 2008 : 13:13:54

che io sappia un nanogrammo di plasmide è sufficiente ad ottenere colonie se le cellule competenti sono veramente competenti. Se eccedi con le quantità di plasmide (sempre nel caso delle cellule veramente competenti) hai una piastra confluente da cui non riesci a distinguere la singola colonia.
Se hai problemi con la trasformazione controlla che nelle piastre usi l'antibiotico giusto oppure la qualità delle tue cellule competenti e ricorda che quelle con calcio cloruro rimangono competenti per 4-5 gg a 4 gradi e quelle rese competenti con TFB1 e TFB2 sono molto più efficienti e le devi conservare a -80 gradi

il sapere non è sufficiente, bisogna applicare; il volere non è sufficiente, bisogna fare

MatAr
Nuovo Arrivato

3 Messaggi

Inserito il - 28 settembre 2008 : 13:01:03

bene ti ringrazio.

era un piccolo dubbio che mi sono portato per una settimana...

ciao