Precipitazione dei prodotti di PCR

Descrizione

In questo modo è possibile ottenere la precipitaziobe dei prodotti della nostra PCR per poter poi operare con la digestione con un enzima di restrizione (x es).

  • Trasferire la PCR in un eppendorf più grande


  • Aggiungere nell’ordine:

    * 1/10 di V di CH3COONa+ 0.3 M pH = 5.2
    * 2.5 V di EtOH assoluto
    * 20 µg di glicogeno (1microl)
    (il glicogeno è 20 mg/mL che sarebbe uguale a 20 µg/ µl)



  • Invertire e mettere a -80°C per 15 minuti


  • Centrifugare per 15 minuti a 13.000 giri


  • Eliminare il surnatante con una pasteur affilata


  • Aggiungere 100 µl di EtOH al 70%


  • Centrifugare per 5 minuti a 13.000 giri


  • Eliminare il surnatante


  • Asciugare all’aria fino a quando il pellet diventa trasparente


  • Risospendere in 10-20 µl di acqua distillata


  • Conservare a -20°C