Protocollo - Colorazione argentica

Colorazione argentica

Descrizione

Il Silver Stain consente di colorare le proteine separate in un gel di poliacrilammide. Questo sistema è usato delle volte anche per la colorazione del DNA. Per le proteine il metodo è molto più sensibile del Blue Coomassie ma non è quantitativo.

SOLUZIONI
FIXING SOLUTION: 40% etanolo; 10% acido acetico.
WASHING SOLUTION I: 30% etanolo.
WASHING SOLUTION II: 20% etanolo.
SENSITIZER SOLUTION: 0,02% Na2S2O3
SILVER STAIN: 0,2% AgNO3 -fotosensibile- (Aggiungere 0,02% di Formaldeide prima dell’uso).
SOLUZIONE DI SVILUPPO: 3% Na2CO3 (Aggiungere 0,05% di Formaldeide prima dell’uso).
BLOCKING SOLUTION: 0,5% Glicina.

PROCEDIMENTO

Incubare il gel nella Fixing solution minimo 3h

Lavare 20’ nella Washing Solution I

Lavare 20’ nella Washing Solution II

Lavare 20’ in H2Omq

Incubare il gel 1’ in Sensitizer solution

Lavare 20’’ in H2Omq (x3)

Colorare per 20’ con il Silver Stain

Lavare 20’’ in H2Omq (x3)

Incubare 3-5’ nella Soluzione di Sviluppo

Lavare 20’’ con H2Odemi

Incubare 5’ nella Blocking Solution

Lavare 10’ in H2Odemi (x3)